项目名称

罗非鱼链球菌病防控技术的研究与应用

主要完成单位

广东海洋大学

高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司

主要完成人

（职称、完成单位、工作单位）

1. 简纪常（职称：教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（1）、（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第1、2件发明专利和第1、2、3、4、5、6、7、8、9和10篇代表性论文专著的作者）

2.汤菊芬（教授级高工、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第1、2件发明专利和第2、4、5和6篇代表性论文专著的作者）

3.蔡双虎（职称：教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（1）、（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第3、5和8篇代表性论文专著的作者）

4. 王蓓（职称：副教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对人对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（1）、（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第1、2件发明专利和第1、3、4、5、6、7、8、9和10篇代表性论文专著的作者）

5. 蔡佳（职称：副教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第2和4篇代表性论文专著的作者）

6. 黄郁葱（职称：副教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（2）项科学发现做出了创造性贡献，是第5篇代表性论文专著的作者）

7. 陈文朗（职称：工程师、工作单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、完成单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

8. 鲁义善（职称：教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（1）、（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第1、2件发明专利和第1、2、3、4、5、6、7、8、9和10篇代表性论文专著的作者）

9. 吴灶和（职称：教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（1）、（2）、（3）、（4）和（5）项科学发现做出了创造性贡献，是第1、2件发明专利和第1、2、3、5、6、8、9和10篇代表性论文专著的作者）

10. 丁燏（职称：教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

11. 庞欢瑛（职称：副教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

12. 闫秀英（职称：副教授、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

13. 黄瑜（职称：无、工作单位：广东海洋大学、完成单位：广东海洋大学、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（2）项科学发现做出了创造性贡献，是第4和9篇代表性论文专著的作者。）

14. 梁峻（职称：工程师、工作单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、完成单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

15. 陈立华（职称：工程师、工作单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、完成单位：高州市朗业畜牧渔业科技养殖有限公司、主要贡献：对本项目《罗非鱼链菌病防控技术的研究与应用》中所列第（5）项科学发现做出了创造性贡献）

项目简介

该成果从"病原－宿主－绿色渔药"三个方面进行研究，建立了罗非鱼链菌病的高效复方中草药免疫增强剂防控技术。在病原方面，对引起罗非鱼链菌病暴发性疾病的病原进行了分离鉴定，确定该菌为无乳链球菌强毒株；进而对无乳链球菌生物学特征进行了系统研究，建立了链球菌LAMP快速诊断技术；对无乳链球菌强毒株培养条件进行优化；克隆了6个毒力蛋白基因并进行了原核表达；构建了PhoB基因缺失突变株和互补株并分析了其生物学特性，同时比较了转录组和蛋白质组图谱；鉴定得到3条有效sRNA并获取所有sRNA全长，构建了sRNA SAR-缺失突变株及回补株并分析突变株生物学特性，同时比较蛋白质组学图谱。在宿主方面，克隆了罗非鱼9个免疫基因全长cDNA序列，并对其中4个基因进行了原核表达，制备了sIgM多抗并对4个组织进行了免疫组化分析；对灭活无乳链球菌诱导前后的罗非鱼免疫基因的组织分布差异及在不同组织中的表达模式进行分析；证实了NCCRP-1与C-type lectin、serotransferrin及CD28与CD80/86互作关系；对CD59的补体抑制活性、对革兰氏阳性菌细胞壁结合的主要组分进行了研究。对10种常见中草药按一定比例配制成五种不同配方复方中草药，通过测定罗非鱼增重率、肌肉成分、血清生化指标、血清免疫指标、肠道菌群变化及对罗非鱼抗无乳链球菌免疫保护力筛选最佳配复方中草药免疫增强剂；结果表明B配方的复方中草药为最佳免疫增强剂，添加于罗非鱼饲料进行投喂后能有效提高罗非鱼免疫指标，增加罗非鱼抗无乳链球菌免疫保护力。对筛选的B配方的复方中草药免疫增强剂按1.5%添加于罗非鱼饲料中采用分段法和不间断投喂法投喂罗非鱼，发现在罗非鱼养殖中采用分段法投喂中草药免疫增强剂是一种实用的措施；将0.5%、1.0%、1.5%和2.0%含量的复方中草药免疫增强剂添加至基础料中分别投喂罗非鱼，测定罗非鱼血清生化和免疫指标、免疫基因表达模式变化、肠道菌群结构变化、肝体比变化、脂肪含量变化、罗非鱼免疫保护力变化和罗非鱼肝脏组织病理学变化，筛选出中草药添加剂按1.0%添加于罗非鱼饲料为最佳。为探究中草药免疫增强剂在罗非鱼养殖中使用安全性，设计对小鼠的急性毒性、亚急性毒性和养殖罗非鱼亚急性毒性试验，发现添加剂量在3%以下时在罗非鱼的养殖中使用是安全的，为该中草药免疫增强剂在罗非鱼养殖实践应用中提供理论依据。2013年-2017年，该中草药免疫增强剂在高州市、雷州市等地开展应用示范，5年来示范面积累计共达到18400亩，取得经济效益总计17039.22万元。中草药免疫增强剂的使用能有效控制罗非鱼链球菌病，减少化学药物的使用，降低养

殖风险，提高水产品的质量，产生良好的社会效益及生态效益。该成果共发表论文27篇，其中SCI收录12篇，获国家发明专利2件，培养研究生16名，其中博士研究生4名。

代表性论文

专著目录

论文1：Integrated analysis neurimmiRs of tilapia (Oreochromis niloticus) involved in immune response to Streptococcus agalactiae, a pathogen

causing meningoencephalitis in teleosts

论文2：Immunostimulatory effects of artificial feed supplemented with a Chinese herbal mixture on Oreochromis niloticus against Aeromonas hydrophila

论文3：Comprehensive identification and profiling of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) microRNAs response to Streptococcus agalactiae infection through high-throughput sequencing

论文4：NK-lysin from Oreochromis niloticus improves antimicrobial defence against bacterial pathogens

论文5：Complete Genome Sequence of Streptococcus agalactiae ZQ0910, a Pathogen Causing Meningoencephalitis in the GIFT Strain of Nile Tilapia (Oreochromis niloticus)

论文6：Molecular characterization and expression of CD2 in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) in response to Streptococcus agalactiae stimulus

论文7：Molecular Cloning and Expression Analysis of IgD in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) in Response to Streptococcus agalactiae Stimulus

论文8：Molecular characterization and expression of CD2BP2 in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) in response to Streptococcus agalactiae stimulus

论文9：Molecular Characterization and Expression of Lck in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) in Response to Streptococcus agalactiae Stimulus

论文10：Immune Response in Tilapia, Oreochromis niloticus, Induced by the Surface Immunogenic Protein (Sip) of Streptococcus agalactiae

知识产权名称

专利1：一种预防罗非鱼脂肪肝病的中药添加剂（ZL201010159276.6）

专利2：一种改善罗非鱼肉质的中草药添加剂（ZL200910132065.0）

推广应用情况

2013 年-2017 年，中草药免疫增强剂在罗非鱼养殖中的应用示范期间，示范点平均每亩比对照点净增加收入2839.87 元，而每亩多投入的中草药成本平均为71.88 元，5 年来示范点总产值为：58228.87 万元，增加净收入达17039.22 万元，经济效益非常可观。更重要的是2013 年和2017 年因示范区暴发罗非鱼链球菌病，示范对照点的未投喂中草药免疫增强剂的罗非鱼因需防控该病而使用了化学药物来调水和治病，给周边的生态环境带来了一定的隐患，而中草药免疫增强剂的使用不仅在有效控制罗非鱼链球菌病这个养殖瓶颈上发挥重要的作用，而且中草药免疫增强剂的使用将能显著减少化学药物的使用，提高养殖的成活率，降低养殖风险，提高水产品的质量，使水产品养殖和出口的规模进一步扩大，具有广阔的市场前景，因此中草药免疫增强剂的推广应用将推动罗非鱼养殖业及相关产业的可持续发展，产生良好的社会效益及生态效益。